金銀花又名忍冬、雙花，為臨床常用中藥。在中成藥中，金銀花或以細(xì)粉直接入藥，或以提取物的形式入藥，但大部分制劑以后者的形式入藥。綠原酸是金銀花的主要抗菌、抗病毒有效藥理成分之一。綠原酸具有較廣泛的抗菌作用，但在體內(nèi)能被蛋白質(zhì)滅活。與咖啡酸相似，口服或腹腔注射時(shí)，可提高大鼠的中樞興奮性。可增加大鼠及小鼠的小腸蠕動和大鼠子宮的張力。有利膽作用，能增進(jìn)大鼠的膽汁分泌。對人有致敏作用，吸入含有本品的植物塵埃后，可發(fā)生氣喘、皮炎等。
圖1.金銀花
圖2.綠原酸物理性狀
目的：建立金銀花提取物中綠原酸含量的HPLC測定方法。方法國產(chǎn)C18柱（4.6mm×250mm，7μm）；流動相為乙腈：0.4%磷酸 （12∶88）；檢測波長為327nm；流速1ml·min-1；進(jìn)樣量10μl；柱溫25℃。結(jié)果綠原酸在0.0716～0.6444μg范圍內(nèi)線性關(guān) 系良好，r=0.9996；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。結(jié)論該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于金銀花提取物的含量測定及質(zhì)量控 制。
為了有效控制金銀花提取物（中間體）的內(nèi)在質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)參考了有關(guān)文獻(xiàn)［2，3］及2005版《中國藥典》［4］方法，采用液相色譜法測定金銀花提取物中綠原酸含量。
1．儀器與試藥
Agilent1100series液相色譜儀（G1322A排氣閥，G1311A泵，G1316A柱溫箱，G1314A紫外檢測器），chemistation色譜工作站，KromasilC18色譜柱，超聲提取器；綠原酸對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號110753-200212），金銀花提取物（實(shí)驗(yàn)室自制），乙腈，磷酸均為分析純；水為雙蒸水。
2方法與結(jié)果
2.1分析方法的建立——分離及檢測條件的選擇
2.1.1色譜條件色譜柱為國產(chǎn)KromasilC18柱（250mm×4.6mm，7μm）；柱溫25℃；流動相為乙腈-0.4%磷酸（12∶88）；流速為1ml·min-1；檢測波長327nm。
2.1.2pH值對峰形的影響綠原酸屬于有機(jī)酸類物質(zhì)，在HPLC測定時(shí)易發(fā)生前沿或拖尾峰，流動相加入酸可以改善這種現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)比較了水、乙酸、磷酸對峰形的影響，當(dāng)選用0.4%磷酸時(shí)，可得到較好的色譜峰形。
2.1.3色譜系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)在選定條件下，綠原酸和樣品中其他組分可基線分離，綠原酸與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)（N）為5000以上。
a-對照品b-供試品
2.2a溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含35.8μg的溶液，即得。
2.3b溶液的制備精密稱取本提取物10mg，置100ml容量瓶中，雙蒸水溶解，超聲2min后，再用雙蒸水定容至刻度，搖勻，過0.45μg微孔濾膜，取續(xù)濾 液即得。
2.4線性范圍的考察及其標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液2，4，6，10，14，18μl，分別注入液相色譜儀。按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積 積分值（A）對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得回歸曲線方程：Y=2468.4X-16.205，r=0.9996。結(jié)果表明，綠原酸在 0.0716～0.6444μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對照品溶液10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各組綠原酸峰面積值，結(jié)果平均峰面積為：840.5，RSD為0.69%（n=6）。
2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8h進(jìn)樣10μl，測得綠原酸的平均峰面積值為：680.24，RSD為：0.38%（n=5），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號（070204）樣品6份，按含量測定方法測定，結(jié)果綠原酸平均含量為28.01%，RSD為1.07%（n=6）。
2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的金銀花提取物6份，分別精密添加綠原酸對照品適量，按供試品溶液的方法制備，測定，計(jì)算回收率。
2.9樣品測定取3批樣品，按照上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μl，依照已確定的色譜條件測定，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸的含量。
3、液相色譜法HPLC測定金銀花中綠原酸討論
金銀花提取物以有機(jī)酸為有效成分，本實(shí)驗(yàn)以綠原酸含量作為金銀花提取物的質(zhì)量控制指標(biāo)，同時(shí)測定了3批金銀花提取物中綠原酸的含量，通過計(jì)算，其含量均在20%以上。本文所建立的方法簡便、快捷，重復(fù)性及穩(wěn)定性均較好，可在實(shí)際生產(chǎn)中用于該提取物的質(zhì)量控制。本文所做的工作為開發(fā)金銀花的相關(guān)產(chǎn)品提 供了質(zhì)量監(jiān)控方法。
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