靈芝多糖是靈芝的主要生物活性成分，存在于天然靈芝子實體、 孢子粉和菌絲體中，是靈芝扶正固本的有效成分，具有抑制腫瘤，提高機體免疫力，消除自由基，抗血栓，降血糖等作用。由于該藥物在制備和精制過程中使用了乙醇、丙酮、正丁醇等有機溶劑，故對此3種溶劑的殘留量進(jìn)行檢測以保證產(chǎn)品質(zhì)量，對改進(jìn)生產(chǎn)工藝也有指導(dǎo)作用。本實驗參考中國藥典氣相色譜法測定有機溶劑殘留的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行了以下實驗。
1儀器與試劑
日本島津GC2010型氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測器，島津GCSolution工 作 站日 本 。梅特勒電 子天平。赤芝藥材。靈芝多糖樣品(批 號20080911、20080923、20081012) ;乙 醇(分 析純) ，丙酮(分析純) ，正丁醇(分析純) ，乙酸乙酯(色譜純) ，二甲亞砜(色譜純)。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱:DB-624(30m×0.25mm×1.4μm，固 定 液:6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷)。柱溫起始為40°C，維持2min，以20°C/min升至100°C，維持6.5min，以50°C/min升至230°C，維持5min。進(jìn)樣口溫度:260°C，檢測器溫度:260°C。載氣為高純氦。分流比為40∶1。檢測器:FID(空氣流速:400mL/min，氫氣流速:40mL/min)。進(jìn)樣量:1μL。
2.2溶液的配制
取4個25mL量瓶，先各加入適量的二甲亞砜，然后往各量瓶分別精密加入乙醇125.5mg，丙酮125.2mg，正丁醇126.0mg，乙酸乙酯125.8mg，再加二甲亞砜溶解并稀釋至刻度，充分搖勻，作為儲備液。
2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗
準(zhǔn)確量取各貯備液1.0mL于一個10mL量瓶中，用二甲亞砜定容至刻度，充分搖 勻 后 進(jìn) 樣1μL，結(jié)果 如 圖1所示，各峰保留時間分別為乙醇3.927min，丙酮4.339min，乙酸乙酯5.893min，正丁醇7.216min。各色譜峰分離良好，專屬性強。
2.4線性試驗
精密吸取上述貯備液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL分別置于5個100mL量瓶中，各加乙酸乙酯1.0mL作為內(nèi)標(biāo)，用二甲亞砜定容，充分混勻，進(jìn)樣1μL。計算得各待測溶劑的回歸方程，結(jié)果見表1。
2.4線性試驗
精密吸取上述貯備液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL分別置于5個100mL量瓶中，各加乙酸乙酯1.0mL作為內(nèi)標(biāo)，用二甲亞砜定容，充分混勻，進(jìn)樣1μL。計算得各待測溶劑的回歸方程，結(jié)果見表1。
測定法:取對照溶液與供試品溶液各1.0μL分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如顯有機溶劑峰，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算含量。批號為20080911、20080923、20081012的3批樣品中，丙酮、正丁醇均未檢出;乙醇的含量分別為0.1059%、0.1126%、0.1096%，均低于乙醇的限度要求。(中 國 藥 典2005年版明確規(guī)定了藥品中常見的殘留溶劑及限度，其中丙酮、正丁醇、乙醇的限度均為0.5%。)
2.8回收率試驗
分別精密吸取各貯備液1.0mL，內(nèi)標(biāo)液1.0mL，加入100mL量瓶中，加二甲亞砜定容至刻度，充分混合均勻后作為對照液。精密稱取6份樣品各約1g于100mL量瓶中，在每份中加入各貯備液1.0mL，內(nèi)標(biāo)液1.0mL，用二甲亞砜定容至刻度，充分混勻后進(jìn)樣1μL。計算各溶劑峰和內(nèi)標(biāo)峰的峰面積比，測得各溶劑的回收率分別為乙醇102.8%，丙酮101.6%，正丁醇103.4%，RSD分 別 為1.57%，0.89%，2.02%。
3討論
3.1在本試驗中柱溫的選擇是關(guān)鍵，測定時采用程序升溫的方法以改善峰形和加快出峰速度。先在40°C保持2min，使低沸點組分先流出，然后逐漸升溫至100°C保持6.5min，加快高沸點組分出峰，有助于改善峰形。zui后在230°C保持5min，使溶劑峰充分排出。
3.2實驗采用乙酸乙酯為內(nèi)標(biāo)測定3種有機溶劑的殘留量，色譜圖顯示溶劑、內(nèi)標(biāo)以及待測組分間能基線分離，無干擾;方法操作簡便快速，重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度較好，線性、檢出限和精密度等均滿足定量分析的要求，適用于靈芝多糖中殘留溶劑的檢測。
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